کیت ELISA بر اساس فاز جامد آنتی ژن یا آنتی بادی و برچسب گذاری آنزیمی آنتی ژن یا آنتی بادی است. آنتی ژن یا آنتی بادی متصل به سطح حامل جامد همچنان فعالیت ایمنی خود را حفظ می کند و آنتی ژن یا آنتی بادی نشاندار شده با آنزیم هم فعالیت ایمنی و هم فعالیت آنزیمی خود را حفظ می کند. در زمان تعیین، نمونه تحت آزمایش (که در آن آنتی بادی یا آنتی ژن اندازه گیری می شود) با آنتی ژن یا آنتی بادی روی سطح حامل جامد واکنش نشان می دهد. کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی تشکیل شده بر روی حامل جامد با شستشو از سایر مواد موجود در مایع جدا می شود.
آنتی ژن ها یا آنتی بادی های نشاندار شده با آنزیم اضافه می شوند که همچنین با واکنش به حامل جامد متصل می شوند. در این زمان، مقدار آنزیم در فاز جامد متناسب با مقدار ماده موجود در نمونه است. پس از افزودن سوبسترای واکنش آنزیمی، سوبسترا توسط آنزیم کاتالیز می شود تا به محصولات رنگی تبدیل شود. مقدار محصول ارتباط مستقیمی با مقدار ماده آزمایش شده در نمونه دارد، بنابراین می توان آنالیز کیفی یا کمی را با توجه به عمق رنگ انجام داد.
راندمان کاتالیزوری بالای آنزیم ها به طور غیر مستقیم نتایج پاسخ ایمنی را تقویت می کند و سنجش را بسیار حساس می کند. ELISA می تواند برای تعیین آنتی ژن ها استفاده شود، اما همچنین می تواند برای تعیین آنتی بادی ها استفاده شود.
اصول اولیه کیت الایزا
از واکنش اختصاصی آنتی ژن و آنتی بادی برای اتصال جسم به آنزیم استفاده می کند و سپس واکنش رنگی بین آنزیم و سوبسترا برای تعیین کمی ایجاد می کند. هدف اندازه گیری می تواند آنتی بادی یا آنتی ژن باشد.
در این روش تعیین سه معرف ضروری است:
آنتی ژن یا آنتی بادی فاز جامد (جاذب ایمنی)
آنتی ژن یا آنتی بادی نشاندار آنزیمی (نشانگر)
¢ سوبسترا برای عمل آنزیم (عامل توسعه رنگ)
در اندازه گیری، آنتی ژن (آنتی بادی) ابتدا به حامل جامد متصل می شود، اما همچنان فعالیت ایمنی خود را حفظ می کند و سپس یک مزدوج (مارکر) از آنتی بادی (آنتی ژن) و آنزیم اضافه می شود که همچنان فعالیت ایمنی و آنزیم اولیه خود را حفظ می کند. فعالیت. هنگامی که مزدوج با آنتی ژن (آنتی بادی) روی حامل جامد واکنش می دهد، بستر مربوط به آنزیم اضافه می شود. یعنی واکنش و رنگ هیدرولیز کاتالیزوری یا REDOX.
سایه رنگی که تولید می کند متناسب با مقدار آنتی ژن (آنتی بادی) است که باید اندازه گیری شود. این محصول رنگی را می توان با چشم غیر مسلح مشاهده کرد، میکروسکوپ نوری، میکروسکوپ الکترونی، همچنین با اسپکتروفتومتر (ابزار برچسب آنزیمی) قابل اندازه گیری است. روش ساده، راحت، سریع و خاص است.